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Get到這幾招，方可輕松搞定SDS-PAGE電泳實驗！
發(fā)布時間： 2021-09-03 點擊次數(shù)： 1871次SDS-PAGE 作為一個老生常談的實驗，早已廣為科研者所知。然而該實驗雖然基礎(chǔ)，但是細(xì)節(jié)繁瑣，耗時長久，光是配制試劑就要花費 2 個小時左右。而這還只是 Western blot（WB）的第一步，也使得完成 WB 實驗將會耗費 2 天左右的時間。 這也難怪科研者們常說，一入 WB 深似海，從此休閑是路人。不過，實踐出真知，長期在該實驗里跌爬滾打也總結(jié)出了若干小技巧，可使大家輕松快捷的完成該實驗。
1、未雨綢繆，做好萬全準(zhǔn)備
常言道，不打無準(zhǔn)備之仗，方能立于不敗之地。實驗中種種試劑、抗體等等均是完成實驗這座大廈的基石，如果基石打不牢，實驗很有可能會半路夭折。而實驗中最痛苦的莫過于與實驗結(jié)果就差那么一步之遙。
以 Western blot（WB）為例，這眼瞅著就要到條帶現(xiàn)身的奇跡時刻，卻愣是讓曝光試劑的匱乏給硬生生的截斷了見證過程，又怎會不讓人懊惱上火呢？
其實，上述窘境皆是科研者在實驗前準(zhǔn)備不足所致，若是能提前發(fā)現(xiàn)試劑的不足，或?qū)υ噭┲匦掠嗁?，又或者重新配制溶液，均能再次推進(jìn)實驗進(jìn)程。然而就這訂購或配制試劑的過程無疑會消耗我們的時間以及精力。
那么為了避免原材料浪費以及節(jié)省更多的時間，SDS-PAGE 電泳過程中的一些試劑還是早早的配制并妥善保存起來為好，如此方可以備不時之需。
緩沖液（buffer）:
關(guān)于這一點，你可能早已知曉，但再次重復(fù)一遍也不是壞事。實驗中可將所有的凝膠緩沖液進(jìn)行一次性大量配制，如此可方便后續(xù)實驗中對其的任意使用。至于配制的濃度，10x 濃度是實驗室配制母液常用的濃度。有些實驗室會多次重復(fù)利用這些凝膠電泳緩沖液，在這種情況下，建議每次使用 buffer 時均要在緩沖瓶上貼一個標(biāo)簽，已記錄使用的次數(shù)，超過一定期限后就要對緩沖液進(jìn)行重新配制，以免對實驗結(jié)果造成影響。
過硫酸銨（APS）：
在接觸 SDS-PAGE 電泳之初，每次配膠時均會制備新鮮的 APS，可后來發(fā)現(xiàn)溶解后的 APS 在分裝后，可在-20℃冰箱中得以長期儲存。另外，如果你需要經(jīng)常使用 SDS-PAGE 凝膠，那么可取出一只分裝后的 APS 溶液，將其置于 4℃冰箱里，可保證其一個月不會過期。
凝膠（gel）：
凝膠是現(xiàn)用現(xiàn)配的好，已成為了各位心中的常識，那么是不是就意味著凝膠不能提前制備么？其實不然，提前準(zhǔn)備好的凝膠在 4℃冰箱中大致可以保持兩周左右。但需要謹(jǐn)記的是在儲存凝膠時，保持凝膠濕潤是非常重要?？梢詫⒛z板、梳子甚至整個固定裝置都裝入一個充滿蒸餾水的塑料盒中，而后再將其放在 4℃冰箱中進(jìn)行保存。
樣品（sample）：
大家都知道，制備好的蛋白樣品要放在-20℃冰箱中進(jìn)行存儲，有時一些稀少珍貴的樣品甚至還要放在-80℃冰箱里保存。在此，建議在儲存近期就要進(jìn)行 PAGE 電泳的蛋白樣品時，可將該蛋白樣品與 loading buffer 混合在一起，加熱變性之后再進(jìn)行儲存。如此就可以在上樣前，將蛋白樣品解凍并離心即可。用該法儲存樣品長達(dá)一年的時間，且實驗結(jié)果依然沒有被破壞。
2、改變分離膠的覆蓋液體
通常多數(shù)人在制備好分離膠后，會用蒸餾水覆蓋其上，以避免分離膠的高低不平。但是實際上，此時用異丙醇代替水的效果會更好，因為異丙醇可以更好保護(hù)凝膠，并使凝膠更快地發(fā)生聚合，進(jìn)而節(jié)省制膠的時間。
3、緩沖液不夠用？準(zhǔn)備些彈珠吧
有時，實驗過程中，你會忽然發(fā)現(xiàn)沒有足夠的電泳緩沖液，此時一個節(jié)省時間的方法就是在現(xiàn)有電泳緩沖液添加一些彈珠（是的，就是我們小時候曾經(jīng)玩過的），以提高緩沖液的高度水平來保證緩沖液能沒過上樣孔。 但是要確保這些彈珠是潔凈的，否則一旦其對上樣的蛋白樣品造成了污染，就不要妄想此次實驗會得到一張漂亮的實驗結(jié)果圖片了。
4、傳輸緩沖區(qū)
每個做 SDS-PAGE 電泳的童鞋，只怕都擔(dān)心過內(nèi)腔中的電泳緩沖液會有所泄露，畢竟當(dāng)緩沖液水平降低過多，以至于不能達(dá)到覆蓋加樣孔時，就會導(dǎo)致孔內(nèi)變得干燥，進(jìn)而使得凝膠電泳變得無法正常運行。也許，有人會建議你，當(dāng)你發(fā)現(xiàn)緩沖液下降的太過厲害，則需要暫停電泳，打開電泳槽，重新給內(nèi)腔添加電泳液，而后再次開啟電泳過程?？赡茈娪酒陂g你會多次重復(fù)該過程直至實驗完成為止。
顯然，該方法需要大家時刻關(guān)注電泳槽內(nèi)腔類電泳液的高低水平變化，其實也是蠻費時費力的。而有個簡單粗暴的做法，即一次性在內(nèi)腔外部也添加同水平的電泳液，如此便可以一勞永逸的解決內(nèi)腔電泳液泄露問題。
參考文獻(xiàn)：SDS-PAGE Tips and Tricks to Save You Time
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