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大鼠胰腺移植模型制作
發(fā)布時(shí)間： 2023-04-11 點(diǎn)擊次數(shù)： 1321次原理
成功的胰腺移植能為糖尿病患者或試驗(yàn)對(duì)象提供具有正常功能的胰腺組織，能生理性調(diào)節(jié)胰島素的分泌，維持正常血糖，阻止甚至逆轉(zhuǎn)糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生、進(jìn)展。目前建立的模型多是供胰的靜脈回流采用供體門靜脈與受體下腔靜脈端側(cè)吻合的體循環(huán)回流方式。材料與儀器
供、受者大鼠
鏈脲霉素 10%的四氧嘧啶 葡萄糖生理鹽水 1%的戊吧比妥鈉 乙-醚 25U L肝素溶液 無(wú)菌水
顯微外科手術(shù)器械包 手術(shù)顯微鏡 眼科剪 手術(shù)器械步驟
一、供、受者大鼠的選擇
根據(jù)不同的研究目的選擇不同的動(dòng)物品系，在同種移植模型中，一般采用兩種純系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，國(guó)內(nèi)應(yīng)用Wistar，SD大鼠也比較多。其中受者大鼠于移植手術(shù)前制備成糖尿病模型。
二、大鼠糖尿病模型的建立
1. 方法一：10%的四氧嘧啶按100mg/kg的劑量連續(xù)兩天于大鼠腹股溝區(qū)皮下注射，隔日測(cè)定血糖，一周后血糖持續(xù)>16.7mmol/L者，作為合格的糖尿病受者大鼠。
2. 方法二：采用70mg/kg肌肉注射鏈脲霉素，以尿糖定性強(qiáng)陽(yáng)性，非禁食血糖>20mmol/L持續(xù)10天者為穩(wěn)定的糖尿病模型。
3. 方法三：受者鼠一次性靜脈注射鏈脲霉素55mg/kg，第7d開始測(cè)定非禁食血糖，若血糖濃度連續(xù)3d超過(guò)22mmol/L，判定為大鼠糖尿病誘導(dǎo)成功。
三、術(shù)前準(zhǔn)備及麻醉方式
術(shù)前供者禁食24h，飲用50g/L葡萄糖生理鹽水，受者禁食24h，飲用25g/L葡萄糖生理鹽水，供、受者麻醉均采用1%的戊吧比妥鈉40mg/kg腹腔注射，麻醉過(guò)淺時(shí)加乙-醚吸入輔助。
四、供胰切取術(shù)
1. 麻醉成功后，經(jīng)腹正中切口進(jìn)腹。
2. 將胃向上翻起，結(jié)扎切斷胰腺和大網(wǎng)膜之間的血管聯(lián)系及胃網(wǎng)膜左右動(dòng)靜脈，結(jié)扎十二指腸近端，切斷幽門，在食管與胃交界出結(jié)扎切斷胃左血管、食管，結(jié)扎切斷胃短動(dòng)脈并切除全胃。
3. 胰腺下緣自脾臟向胰頭方向游離胰腺，保留胰管入十二指腸管約1.5cm，結(jié)扎切斷腸系膜上血管。
4. 結(jié)扎切斷膽總管及肝固有動(dòng)脈，游離門靜脈至入肝門分叉處。
5.打開腹主動(dòng)脈前被覆的后腹膜，結(jié)扎切斷左右腎及腎上腺動(dòng)脈，全部游離腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈所在的腹主動(dòng)脈段，經(jīng)陰莖背靜脈注入肝素（25U/L）生理鹽水。
6. 分別結(jié)扎腸系膜上動(dòng)脈開口以下和腹腔動(dòng)脈開口以上的腹主動(dòng)脈，腸系膜上動(dòng)脈開口以下腹主動(dòng)脈插管，予以4℃ Euro Collins液（或者4℃平衡液25U/L肝素溶液）灌洗移植物，同時(shí)橫斷門靜脈，灌洗至門靜脈斷端流出液轉(zhuǎn)清，移植物顏色由淡紅變?yōu)樯n白。
7. 灌洗完成后，完整地切取移植物及脾臟，移植物置4℃Euro Collins液中保存。
五、供胰植入術(shù)
1. 腔靜脈-膀胱引流式胰腺移植
（1）下腹正中切口進(jìn)腹，用生理鹽水紗布將腸管推向上方，膀胱、精囊腺推向下方并以拉鉤固定，游離髂血管分叉上方1.5cm左右的腹主動(dòng)脈及下腔靜脈，經(jīng)陰莖背靜脈注射肝素（25IU/L）至全身肝素化。
（2）血管夾阻斷游離血管上下端，9-0無(wú)創(chuàng)顯微縫線作供者門靜脈與受者下腔靜脈連續(xù)端-側(cè)吻合，8-0無(wú)創(chuàng)顯微縫線作供者腹主動(dòng)脈與受者腹主動(dòng)脈連續(xù)端-側(cè)吻合。吻合過(guò)程中移動(dòng)胰腺時(shí)，牽動(dòng)與移植胰腺相連脾臟，避免直接鉗夾移植胰。吻合口及供者腹主動(dòng)脈表面可以涂少量的ZT膠，以封閉吻合口縫隙和腹主動(dòng)脈營(yíng)養(yǎng)血管，切除移植物附帶的脾臟，先遠(yuǎn)心端再近心端松開血管夾，恢復(fù)移植胰血供。
（3）將供者十二指腸段與受者膀胱頂部行側(cè)-側(cè)吻合（3-0絲線單層連續(xù)縫合），吻合口大約0.5cm，大網(wǎng)膜覆蓋移植物，關(guān)腹結(jié)束手術(shù)。
2. 門靜脈-腸道引流式胰腺移植
（1）腹正中切口入腹，打開腹腔，在左腎靜脈以下，分離出腹主動(dòng)脈，用改良過(guò)的李氏鉗縱行夾住該段動(dòng)脈，縱行切開動(dòng)脈閉，用含肝素的平衡鹽溶液沖洗管腔，在低位分離腸系膜上靜脈，近端用微血管夾夾住，遠(yuǎn)端用3-0絲線結(jié)扎，在同一水平高度同時(shí)結(jié)扎腸系膜上動(dòng)脈。
（2）緊靠絲線結(jié)扎處切斷腸系膜上靜脈，管腔同樣用含肝素的平衡鹽溶液沖洗，切斷缺血的小腸及回盲部（30——40%），用7-0尼龍線將兩斷端行端-端全層腸吻合，將移植物從冰水中移出，用帶冰屑的濕紗布覆蓋移植物。
（3）先行靜脈縫合，應(yīng)確保靜脈吻合后無(wú)扭轉(zhuǎn)，供者門靜脈與受者腸系膜上靜脈以10-0無(wú)損傷顯微縫線端-端間斷縫合，在縫合過(guò)程中，用生理鹽水灌洗靜脈腔，并輕輕地用顯微鉗分離血管邊緣，避免吻合口狹窄。供胰腺的腹主動(dòng)脈與受者的腹主動(dòng)脈以9-0無(wú)損傷顯微縫合線行端-側(cè)連續(xù)縫合。
（4）吻合完畢后先松開靜脈夾，再松開動(dòng)脈夾，用干明膠海綿輕壓動(dòng)脈吻合口1——2min。
（5）最后，供胰的十二指腸開口一端與受者近端空腸行端-側(cè)吻合，另一端結(jié)扎。切除供胰上附著的脾臟，關(guān)腹結(jié)束手術(shù)。
六、術(shù)后監(jiān)測(cè)和處理
根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究設(shè)計(jì)的需要監(jiān)測(cè)移植胰功能，如果移植胰功能正常，在發(fā)生排斥反應(yīng)以前空腹血糖值正常，C-肽值正常。
注意事項(xiàng)
1. 術(shù)后注意受者動(dòng)物保溫，可以置于電熱毯上，以電燈熱輻射24h。一般情況下，動(dòng)物于術(shù)后1h內(nèi)從麻醉中蘇醒。
2. 術(shù)后每天皮下注射含25g/L葡萄糖和4.5g/L氯化鈉的糖鹽水30——40ml（內(nèi)含150mg氧哌溱青霉素），36—48h視動(dòng)物情況開始正常飲食。
常見(jiàn)問(wèn)題
1. 手術(shù)順利的大鼠一般在麻醉清醒后即可正?；顒?dòng)，對(duì)外界刺激反應(yīng)靈敏。在血糖恢復(fù)正常后，大鼠的毛色變得有光澤，體重逐漸增加。手術(shù)不成功的大鼠則表現(xiàn)為毛發(fā)凌亂且色澤暗淡，后背拱起，活動(dòng)少，對(duì)外界刺激反應(yīng)性差。2.在正式建模實(shí)驗(yàn)前，*行顯微外科基本功練習(xí)并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)4多次，目的在于進(jìn)一步熟練顯微外科技術(shù)、摸索最佳手術(shù)方式與手術(shù)條件。在手術(shù)方案成熟以后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。
3.來(lái)源論文《大鼠胰腺移植模型的建立及趨化因子在移植排斥反應(yīng)中作用的實(shí)驗(yàn)研究》。深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。
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